液相色譜儀的品牌、種類很多，各家的使用方法也不盡一樣，主要看你是那一款的液相色譜儀，當(dāng)初購(gòu)買設(shè)備時(shí)，廠家的工程師會(huì)培訓(xùn)使用方法。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。液相色譜儀的使用方法：內(nèi)容：1 開(kāi)機(jī)1.1 打開(kāi)電腦。1.2 打開(kāi)液相色譜各個(gè)模塊的電源。1.3 雙擊桌面“儀器—聯(lián)機(jī)"，進(jìn)入聯(lián)機(jī)界面。1.4 排氣：1.4.1 手動(dòng)旋開(kāi)泵處沖洗閥（逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)約1圈）。1.4.2 右鍵單擊“泵"圖標(biāo)區(qū)域，選擇“方法?"選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，設(shè)流速：5ml/min（一般為3－5ml/min），點(diǎn)擊“確定"。1.4.3 右鍵單擊“泵" 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制?"選項(xiàng)，選中“ON"，點(diǎn)擊“確定"，則系統(tǒng)開(kāi)始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止，（一般為5分鐘），切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。1.4.4 右鍵單擊“泵" 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法?"選項(xiàng)，設(shè)流速：0ml/min，手動(dòng)旋緊沖洗閥。1.4.5 右鍵單擊“泵"圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法?"選項(xiàng)，按照方法要求選擇合適比例的流動(dòng)相，設(shè)流速：1.0ml/min。1.4.6 同理右鍵單擊“柱溫箱"，“檢測(cè)器"圖標(biāo)，點(diǎn)擊“方法?"選項(xiàng)，按照方法的要求設(shè)置溫度，波長(zhǎng)，點(diǎn)擊“控制" 選項(xiàng)，“ON"打開(kāi)柱溫箱和檢測(cè)器。2 編輯方法2.1 點(diǎn)擊“方法"－“編輯完整方法"開(kāi)始編輯完整方法。2.2 選中除“數(shù)據(jù)分析 "外的三項(xiàng)，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。2.3 方法信息：在“方法注釋"中加入方法的信息（如：This is for test！）。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。2.4 泵參數(shù)設(shè)定：在“流速"處輸入流量， 如1.0ml/min，停止時(shí)間：如10 min（該停止時(shí)間僅為做一個(gè)樣品需要的時(shí)間），按照要求選擇合適比例的流動(dòng)相配比，如乙腈：水＝75：25，A為水，B為乙腈，則設(shè)置B：75％即可。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。2.5 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定： 選擇“洗針進(jìn)樣"----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。2.6 柱溫箱參數(shù)設(shè)定： 在“溫度"下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度，如：40度。進(jìn)入下一選項(xiàng)卡。2.7 UV檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定： 在“波長(zhǎng)"下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng)，如254nm。點(diǎn)擊確定。2.8 在“ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 "中，選中“ 數(shù)據(jù)采集"，點(diǎn)擊“確定"。2.9 從“方法"菜單，選中“方法另存為?"，輸入一方法名，如“測(cè)試"，點(diǎn)擊“確定。3 單次采集3.1 從“運(yùn)行控制"菜單中，選擇“樣品信息"選項(xiàng)，選擇合適的路徑，在“數(shù)據(jù)文件"中選擇 “前綴/計(jì)數(shù)器"，輸入樣品瓶的位置，點(diǎn)擊“確定"。3.2 基線平穩(wěn)后約10分鐘，從“運(yùn)行控制"菜單中選擇“運(yùn)行方法"。4 多次數(shù)據(jù)采集4.1 按照步驟2 編輯完整方法。4.2 點(diǎn)擊“序列"－“序列表"，輸入“樣品瓶"“樣品名稱"，“進(jìn)樣次數(shù)"，選擇合適的“做樣方法"4.3 點(diǎn)擊“序列"－“序列參數(shù)"，選擇序列數(shù)據(jù)的保存路徑（序列會(huì)自動(dòng)生成以“序列名稱－時(shí)間"為名稱的文件夾保存數(shù)據(jù)），數(shù)據(jù)建議以選擇 “前綴/計(jì)數(shù)器"保存。4.4 從“序列"菜單，選中“序列另存為?"，輸入一序列名，如“測(cè)試"，點(diǎn)擊“確定。4.5 從“運(yùn)行控制"菜單中選擇“運(yùn)行序列"。5 數(shù)據(jù)分析（脫機(jī)狀態(tài)使用）5.1 雙擊“儀器 —脫機(jī)"圖標(biāo) 進(jìn)入的脫機(jī)畫面。5.2 從“視圖"菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析"進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。5.3 從“文件"菜單選擇“調(diào)用信號(hào)"，選中您的數(shù)據(jù)文件名。點(diǎn)擊“ 確定"，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。（如預(yù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)先打開(kāi)濃度較低的標(biāo)樣圖譜。）5.4 做譜圖優(yōu)化：從“圖形"菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)"。從“范圍" 中選擇“滿量程" 或“自動(dòng)量程" 及合適的時(shí)間范圍或選擇“自定義量程" 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定"。6 積分：6.1 從“積分"菜單中選擇“積分事件"選項(xiàng)，選擇合適的“斜率靈敏度"，“峰寬"，“zui小峰面積"，“zui小峰高"。點(diǎn)擊 ，自動(dòng)加載積分參數(shù)。6.2 點(diǎn)擊左邊“√"圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法并退出“積分事件"。6.3 如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。7 標(biāo)準(zhǔn)曲線7.1 點(diǎn)擊“校正"－“校正設(shè)置"，輸入“含量單位"。7.2 點(diǎn)擊“校正"－“新建校正表"，點(diǎn)擊確定。輸入“化合物名稱"和“含量"，點(diǎn)擊“確定"，按照提示刪除其他組分。7.3 至此完成單級(jí)校正，如要增加校正級(jí)別，應(yīng)從“文件"菜單選擇“調(diào)用信號(hào)"，選中您的數(shù)據(jù)文件名（第二個(gè)標(biāo)樣），點(diǎn)擊“校正"－“添加級(jí)別"，點(diǎn)擊確定，輸入“含量"，依次增加校正級(jí)別。8 打印報(bào)告8.1 從“報(bào)告"菜單中選擇“設(shè)定報(bào)告"選項(xiàng)，點(diǎn)擊“定量結(jié)果"框中“定量"右側(cè)的黑三角，選中“外標(biāo)法"，其它選項(xiàng)不變，點(diǎn)擊“ 確定"。8.2 從“報(bào)告"菜單中選擇“打印報(bào)告"，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊“報(bào)告" 底部的“打印"鈕。8.3 點(diǎn)擊“文件"－“另存為"－“方法"，把數(shù)據(jù)分析方法保存，下次分析可直接在“文件"－“調(diào)用"－“方法"下，將該方法調(diào)出使用。（調(diào)用的方法中含有積分方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線方法和打印報(bào)告方法）9 關(guān)機(jī)9.1 關(guān)機(jī)前，先關(guān)紫外燈，用相應(yīng)的溶劑（甲醇或乙腈）充分沖洗系統(tǒng)大約30分鐘。（色譜柱zui終應(yīng)保存在甲醇或乙腈中）9.2 退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。9.3 關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開(kāi)關(guān)。10 其它注意事項(xiàng)10.1 當(dāng)樣品運(yùn)行時(shí)，切勿打開(kāi)自動(dòng)進(jìn)樣器前遮蓋，否則進(jìn)樣過(guò)程停止。10.2 系統(tǒng)發(fā)生漏液時(shí)，機(jī)器會(huì)檢測(cè)到并停止進(jìn)樣，狀態(tài)指示燈為紅色。檢查擦干并安置好漏液處，擦干漏液傳感器，單擊ON按鈕，系統(tǒng)重新初始化。10.3 注意紫外燈使用壽命，切勿來(lái)回開(kāi)關(guān)紫外燈。液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問(wèn)題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域